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找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
找到4项技术成果数据。
找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
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应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
找到4项技术成果数据。
找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
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技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
找到4项技术成果数据。
找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
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技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
找到4项技术成果数据。
找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
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技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
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找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
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应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
找到4项技术成果数据。
找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
找到4项技术成果数据。
找技术 >生物技术法处理废弃几丁质和制备几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、绿色木霉内切几丁质酶基因克隆和序列分析:通过PCR、RT-PCR手段钓取了绿色木霉内切几丁质酶基因DNA及cDNA,通过一系列分子克隆手段,获得了含有内切几丁质酶基因及全长cDNA序列的载体并对其序列特性进行分析。利用各种软件对绿色木霉内切几丁质酶测序结果经过分析,预测了其蛋白质的一级结构、二级结构、亲/疏水性,模拟三级结构的三维模型,为进一步研究该蛋白的高级结构、活性中心位点以及PCR定点突变奠定基础。2、绿色木霉内切几丁质酶在大肠杆菌中的表达研究:构建了含内切几丁质酶的原核表达载体pET28a-ECH和pET28a-MECH,并转化到宿主菌BL21(DE3)中,获得了含有内切几丁质酶重组大肠杆菌。结合SDS-PAGE电泳技术对这两株重组菌产生的蛋白大小进行对比,研究了绿色木霉内切几丁质酶自身的信号肽在大肠杆菌表达时是否被切除。用DNS法测定了重组内切几丁质酶酶活,确定了重组大肠杆菌表达的内切几丁质酶的活力,比较了pET28a-MECH转化BL21重组菌和pET28a-ECH转化BL21重组菌的产酶活力。3、重组大肠杆菌高效表达内切几丁质酶的培养条件的研究及酶学性质研究:对影响重组内切几丁质酶高效表达的几个主要因素如诱导剂添加时间、诱导剂添加量、装液量及接种量等进行了研究。在最佳培养条件下进行诱导表达,并对重组内切几丁质酶的性质进行了研究,如最适反应温度、最适反应pH值、酶的稳定性及金属离子和底物浓度对酶活的影响。4、绿色木霉内切几丁质酶真核表达载体的构建:从含有内切几丁质酶基因的重组大肠杆菌中扩增出内切几丁质酶基因ECH。分别用限制性内切酶EcoRI、NotI对载体pPIC9K和ECH基因进行双酶切并用T4-DNA连接酶连接,构建了含内切几丁质酶基因的真核表达载体pPIC9K-ECH,并将其转化到大肠杆菌DH5α中。对其进行PCR、双酶切鉴定及测序分析。5、绿色木霉内切几丁质酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达研究:用线性化酶Bpu1102I对pPIC9K-ECH进行线性化处理后,电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,并用不同浓度的G418进行高拷贝子的筛选,结合酶活测定方法筛选高产内切几丁质酶的工程菌株,结合SDS-PAGE、PAGE电泳技术及酶谱分析外源内切几丁质酶的蛋白大小。6、重组巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵生产内切几丁质酶的研究:考察了甲醇、油酸、表面活性剂、微量元素、pH值、菌体浓度、装液量及诱导时间对重组内切几丁质酶表达量的影响。在此基础上通过Plackett-Burman实验设计确定了影响重组酵母表达内切几丁质酶的关键因素,并选取了三个重要因素进行响应面实验设计。获得一份发酵生产内切几丁质酶的最佳诱导培养基配方,为以后的高密度发酵培养奠定基础。7、重组内切几丁质酶的分离纯化:收集发酵培养液,用PEG20000浓缩、DEAEsepharoseFF初步分离纯化重组内切几丁质酶。8、几丁寡糖的制备:利用重组内切几丁质酶催化粉末几丁质生成几丁寡糖的最优化工艺流程和工艺参数。内切几丁质酶毕赤酵母工程菌能够降解昆虫及某些真菌的细胞壁,可制成活菌制剂,是一种良好的生物农药,在植物抗真菌和抗病虫害方面具有较好的应用前景。几丁寡糖具有重要的生理功能:(1)几丁寡糖具有清爽的甜味,有吸湿和保湿性,其在水中溶解度比单糖低,有助于调整食品的水活性,增进保水性,兼具调味和改良食品质构的功能,另外几丁寡糖可促进肠道内有益菌(Bifidus)的增殖并抑制大肠杆菌及肠道内病原菌的生长,是一种良好的双歧杆菌增殖因子;(2)在农业方面几丁寡糖可用作饲料添加剂,提高动物免疫力,在植物中具有防治植物病虫害、促进植物生长的功能,几丁寡糖能够启动植物防御系统,使其本身处于不易受侵害的生态环境中,同时该寡聚糖具有抗菌、抑菌效果,用该类寡糖做的肥料不利于土壤中病菌和细菌的生长;(3)在医药工业中,几丁质经酶作用后所产生的寡糖具有抗癌作用,活化机体免疫功能,诱使胰脏淋巴T细胞产生Interleukin,且对生物体无毒性或低毒性;(4)在化妆品中利用该寡聚糖良好的保湿性可作为保湿乳液、化妆水的原材料,该产品效果与hyaluronicacid类似,但成本降低近一半。该产品还可用于发胶中,能保护头发,赋予光泽,具有紫外吸收性,可防止头发受到紫外光的破坏,几丁寡糖研制开发国外走在前列,国内五十年代初才开始进行研究,直到八十年代后才受到重视。该省海洋资源丰富,淡水养殖业发展也相当迅速,因而几丁质资源非常富裕。虽然有一些从事几丁质开发利用的生产厂家,但产品仅限于生产几丁质及壳聚糖,作为化工及医药等原料出口,环境污染大、附加值低;而几丁寡糖具有区别于单糖的许多重要的生理功能,是一种具有广泛应用的产品,附加值高,市场紧缺。该项目的研究既能有效利用几丁质资源,解决几丁质所导致的环境污染问题,又能生产高附加值的产品几丁寡糖,对于防止资源浪费、增加经济效益和劳动力就业、提高环境保护等具有重要的意义,因此经济、社会和生态效益较好,市场及应用前景广阔。
重组海洋几丁质酶生产几丁寡糖的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
为了解决几丁质酶法降解几丁质生产几丁质寡糖效率低和几丁质单糖污染的问题,该课题采用几丁质酶基因工程改造和转座子突变等技术,开展了重组几丁质酶和酶系,几丁质酶法生产中试生产工艺等研究,并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动,于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。高产几丁质酶的基因工程菌:该成果成功构建获得了高产几丁质酶的基因工程菌株。该菌株是对野生高产几丁质酶菌株的进一步改造,在野生菌株的基因组中编码δ32因子的基因被转座子插入失活。转座子在基因组中的插入非常稳定,并且为单位点插入。δ32因子突变后构建的基因工程菌不需要几丁质等诱导物的诱导而大量产酶,产酶能力是野生菌株(必须经过几丁质的诱导)的8-10倍。该菌株的发酵工艺较普通野生几丁质产酶菌株大大简化,培养基中不需要添加额外的几丁质诱导物,发酵成本可大大降低,发酵时间也可缩短。该菌株不仅可用于大量生产几丁质酶,还可用于生产低分子量几丁质寡糖。该基因工程菌株已通过中试生产几丁质酶,获得的酶用于大规模低分子量几丁质寡糖的中试生产。酶法生产几丁寡糖的生产工艺:该成果成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁质寡糖,制备大量几丁质寡糖混合物的工艺。用酶法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁质2,3,4糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批次法高,设备使用率高。用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已建成。该课题发表论著国外2篇;申请发明专利3项;培养博士2名、硕士2名。
高附加值几丁寡糖的酶法生产
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
中国是产甲壳质大国,每年生产量约为2000-3000吨。但我们对甲壳质的开发利用还相当有限。目前还只能生产技术含量低的初级加工产物,高技术含量的产品如低分子量几丁寡糖只能依赖进口。将虾、蟹壳深加工将解为低分子量寡糖是几丁质再利用的重要途径。几丁质只有经转化、将解成低分子量寡糖才能被人体吸收,发挥作用。低分子量几丁寡糖一般是指聚合度为2-20的多聚N-乙酰氨基糖,是一类生物信号因子,具有多种生物活性,在爱滋病、心血管疾病、癌症治疗以及口腔医学、人体保健等领域有着广泛应用。另外,几丁寡糖还可以作为植物功能调节剂,促进植物生长,激活植物防御体系,因而又被称为新型的植物抗性诱导剂和新型生物农药。为了利用具有我国自主知识产权的的几丁质酶基因及先进的分子生物学技术来深度挖掘几丁质酶的应用潜力,通过蛋白质工程手段改造天然几丁质酶,解决酶降解产物中单糖含量偏高的问题,进行大规模的发酵,生产高纯度符合出口标准的几丁质寡糖,项目组于2003年向厦门海洋研究开发院提出开展厦门海洋研究开发院共建项目“高附加值几丁寡糖的酶法生产”的申请,2003年厦门海洋研究开发院批准了该项目的研究工作。该项目利用该课题组研发的三代几丁质酶产生基因工程菌,进行了5-150升发酵工艺的中试研究。建立了几丁质单、寡糖吨级中试生产线,包括各类发酵罐7台、超滤/纳滤体系、连续流离心机、100-800升酶反应罐、喷雾干燥等。能进行几丁一、二、三、四糖的高效生产及实验室规模几丁五、六及高糖制备。成功设计了连续发酵法产酶,并将酶液直接用于降解几丁质胶体,酶反应罐连续生产几丁寡糖,制备大量几丁寡糖混合物的工艺,用膜法进行分离提纯制得大批量高纯度几丁二、三、四糖混合物。该工艺特点是连续生产,连续分批补加酶反应液和几丁质胶体,产量比批式法高。设备使用率高,用膜法分离、提纯、浓缩,能耗低。目前该工艺的年产吨级几丁寡糖混合物的中试生产线已在海洋三所建成,并已试运行。完成了几丁寡糖混合物(含量超过85%)和几丁二糖(纯度大于95%)的样品质量检验。建立了薄层层析法快速检测几丁寡糖。实现了发酵培养基国产化。有关产品可作为生化试剂、保健品并努力开发成为原料药,已经有企业开展糖尿病药物和抗菌产品的研发。该成果申请国家发明专利2项。
一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂,所述疫苗佐剂包含几丁寡糖,所述几丁寡糖由以下方法制备:壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖,将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应,制备聚合度为2-10的几丁寡糖;或者,利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖;所述几丁寡糖的乙酰度90%,分子量范围为400~2000Da。本发明的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。