找到122项技术成果数据。
找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
找到122项技术成果数据。
找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
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找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
找到122项技术成果数据。
找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
找到122项技术成果数据。
找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
找到122项技术成果数据。
找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
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找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。
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找技术 >一次性大肠杆菌生化管
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:科学研究和技术服务业
技术简介
该成果把《药品卫生检验方法》中规定使用的大肠杆菌生化培养基成功地与药品生产中的安瓿灌封技术结合在一起。利用其原理,由原来用试管装培养基改为用安瓿装,使培养基能长期保存,避免蒸发,保持其稳定性。该成果特点为:①可以批量生产,便于统一标准;②便于保存,不易污染;③省工、省料、省时,既能保证质量,又能提高经效益;④便于运输、携带,使用方便,适用于药检、教学和科研,尤其为基层医疗卫生单位使用提供了方便。
猪致病性大肠杆菌温控菌蜕菌株的制备及免疫原性研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
1、任务来源 滨州市科技发展计划项目,2011年12月立项,项目编号2011ZC0707。 2、应用领域和技术原理 细菌菌蜕是通过调控phiX174噬菌体的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的缺少细胞浆和核酸以及无繁殖能力的细菌空壳。克隆在质粒上的phiX174噬菌体溶菌E基因在大肠杆菌中表达后通过寡聚化可形成一跨膜孔道,导致宿主菌细胞内容物外流而溶菌形成菌蜕。这种由E基因介导制备的菌蜕实际上是在非变性条件下灭活了的细菌菌体,与传统的灭活疫苗相比,这种基因灭活过程不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化,完好地保留了与活菌一样的细胞膜结构和相关抗原蛋白,没有任何免疫原性的改变,是优良的候选灭活菌体疫苗,为大肠杆菌的防控提供新思路。 3、性能指标 (1)构建1株非质粒依赖性猪致病性大肠杆菌菌蜕菌株。 (2)确定phiX174噬菌体溶菌基因E工程菌株温控融菌变化曲线。 (3)制备一批大肠杆菌菌蜕并进行冻干保存,免疫新西兰白兔采集血清,微量凝集法测定抗体滴度变化,对该菌蜕的免疫原性进行初步研究。 4、与国内同类技术比较 目前,通过E基因介导的裂解而形成菌蜕已在多种革兰氏阴性菌中试验成功,包括禽大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等,其采用的技术均是直接将E基因表达质粒转入菌体内,构建的是质粒依赖性菌蜕,而 本项目采用的是利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建了非质粒依赖型菌蜕菌株,与上述质粒依赖型相比,这种非质粒依赖型菌蜕菌株可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,同时不需要抗生素进行筛选,为菌蜕疫苗的制备缩减了成本,因此具有更大的应用潜力。 本项目以猪致病性大肠杆菌O139为研究对象,构建非质粒依赖性菌蜕菌株并研究其裂解效率及免疫原性,目前,在国内尚未有这方面研究报道。 5、成果的创造性、先进性 (1)将phiX174噬菌体溶菌基因E扩增产物定向克隆至pBV220温控表达载体,构建温控融菌表达质粒,较之化学诱导系统更具优势,使细菌菌蜕的制备简易化、程序化,为后续实现工业化生产奠定基础。 (2)选择lacZ基因作为温控融菌表达盒与该致病性大肠杆菌同源重组的重组臂,在筛选培养基上,通过观察颜色变化即可获得同源重组菌株,使其更具可操作性。同时也减少了抗生素的使用。 (3)利用大肠杆菌lacZ基因同源重组技术构建猪致病性大肠杆菌非质粒依赖性菌蜕菌株,可避免由于溶菌质粒的丢失而导致的溶菌效率降低,从而消除融菌基因的数量不平衡性,保证菌蜕形成的均一性。 6、作用意义 (1)直接经济效益 平均单位规模投入产出实物表及新增纯收益表 项目 科研成果 对照 增减效益 育肥猪 种猪 产出 育肥猪降低死亡率10%,每头单价1200元 1200×10% 0 120 种猪降低死亡率10%,每头单价5000元 5000×10% 0 500 支出 每头育肥猪疫苗费 -1.0 0 -1.0 每头种猪疫苗费 -2.0 0 -2.0 新增纯效益 119 498 (2)社会意义 猪致病性大肠杆菌菌蜕疫苗作为新型灭活疫苗,具有许多优势,如免疫原性强、具有安全和易于运输保存等优点, 是一种良好的候选疫苗, 具有较强的推广价值与产业化前景。该项目的推广应用,将对养猪业的健康发展具有重大推动作用,将有助于提高农民养殖的积极性,带动养猪产业的蓬勃、健康发展,会给社会节约巨大的财富产生巨大的社会效益。
基因疗法的非病毒载体--质粒DNA的生产
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一、项目特点和技术指标基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vectr),以将安装在其上的重组治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因去而代之,然后再通过病毒"感染"方式植入疗效基因。质粒DNA作为一种新的非病毒转基因载体,优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等;缺点是基因表达的时间短、转染效率较低等,质粒DNA作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒DNA必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、容易控制以及高重复性的生产过程,提纯的产品必须高度均一,不含细菌杂质和有害物质,所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外,细胞中的杂质如RNA,蛋白质,脂多糖等必须从产品中分离出去,因为这些物质可能直接引起免疫反应。二、项目成熟程度质粒DNA的生产过程可概括为三步:第一步将治疗基因与真核生物促进子(prmtr)一起克隆到原生质载体中,然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。第二步是在生化反应器中培养带质粒DNA的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯质粒DNA的ccc形式。目前已完成了基因治疗载体pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、pUK21CMV?在大肠杆菌中的克隆,完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质粒的工艺,以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成熟。三、应用范围(1)供科研院校及医院作为实验试剂。(2)作为生物药物,作为基因治疗的临床应用。四、投产条件和预期经济效益目前基因疗法质粒的市场价约为600美元/50微克。利用大肠杆菌表达,经估算,可将生产成本降低到100美元/50微克以下。因此一旦市场成熟,将具有极大的经济效益。六、合作方式技术转让或联合生产,具体合作方式可商议。
兽药系列产品
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
(1)雏鸡旺:本品含多种维生素和抗菌药物,对雏鸡大肠杆菌、白痢、葡萄球菌、细菌性肠炎、脐炎等病有特效,能促进雏鸡生长,提高雏鸡的抗病力及成活率,具有抗应激作用,尤其适用于雏鸡因长途运输后造成的饥饿及脱水症,是雏鸡必备的保健用品;(2)鸡球净:本品对鸡的各种球虫均有较强的快速杀灭作用,主要用于鸡球虫病的治疗。对鸡霉形体病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、巴氏杆菌病等细菌性疾病同样有效;(3)痛风清:本品能有效减少尿酸盐的生成和促进尿酸盐排泄,可用于多种原因引起的禽痛风。如肾型传染性支气管炎、传染性法氏囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、霉菌毒素中毒、磺胺类药物中毒以及由于饲料中高钙、高蛋白等原因引起的尿酸盐沉积和以肾肿为特征的疾病;(4)立克宁:本品为广谱抗菌药。主要用于治疗禽流感、大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、霉形体等感染性疾病;(5)洁超消毒剂:本品对各种病毒、细菌、芽胞、真菌等致病微生物具有强大的杀灭作用。兼备除臭、清洁之功能,使用低浓度可杀灭沙门氏杆菌、大肠杆菌、鸡NDV、IBV、IBDV、MDV和EDS-76V,适用于鸡舍、孵化器具、畜禽饲养场所、蘑菇房、蚕房、畜禽饲养用具、水果蔬菜的浸泡消毒以及畜禽饮用水的消毒;(6)普乐威特:用于鸡粪变稀,粪中带有没消化好的饲料,颜色变为浅黄色、黄白色或有鱼肠子样的粪便、胡萝卜样粪便,采食量下降,增重减慢,易惊群、黎明前突然暴死增多或兴奋不安后瘫痪而死;(7)舒克:本品用于最严重的小肠球虫病。临床表现为排蛋清样、肉样、鱼肠子样、胡萝卜样粪便,腿的颜色变浅,生长速度减慢。个别鸡突然乱窜、疯跑、尖叫瘫痪死亡;(8)鸡康灵散:清热解毒,利湿止痢。用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。
人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本[发明专利]公开了本[发明专利]公开了人乳铁蛋白对奶牛隐性乳房炎病原菌的抑制应用,所述致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌。所述人乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC值为2.5mg/mL,对链球菌的MIC值为20.0mg/mL,对大肠杆菌的MIC值为40.0mg/mL。本[发明专利]以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为对象,考察人乳铁蛋白对牛乳房炎主要致病菌的最低抑菌浓度,考察其对富含重组人乳铁蛋白的转基因奶牛乳房的保健作用,牛乳房中杀菌消毒方面的应用价值。有利于扩大人乳铁蛋白的应用范围。
大肠杆菌发酵生产溶葡萄球菌酶全套生产技术
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介:大肠杆菌工程菌分泌表达发酵生产溶葡萄球菌酶全套工艺技术、及保藏配方和终端产品配方。 全套技术完全转让。br/br/ 项目核心创新点:胞外分泌表达溶葡萄球菌酶,上清蛋白纯度50%以上,发酵产量700mg/L,制备成高纯度冻干粉收率达80%以上。并研制出液体保藏酶的配方,可在室温保藏2年以上。开发出皮肤粘膜消毒剂配方及奶牛乳腺炎冻干粉配方。br/br/ 项目详细用途:发酵生产出的溶葡萄球菌酶冻干粉,活性高纯度高产量高,用途广泛,原料于2019年7月列入消毒剂原料目录,且原料于2016年列入兽药原料目录。可广泛应用于诊断试剂、消毒剂、兽药、无源医疗器械终端产品的开发。br/br/ 预期效益说明:作为科研诊断试剂原料,可销售到科研院校、试剂盒厂家、各疾控中心及医院等单位。作为消毒剂、兽药、医疗器械原料可销售给各生产厂家,市场规模均可达到数十亿/年的规模。目前溶葡萄球菌酶类的终端产品市场刚开始,各企业多数处于试用和开发产品阶段,是很好的一个市场切入时间点。未来市场可期。br/br/ 技术完全转让后,有技术人员全程跟踪教导,包装生产技术可以正常进行,如果技术实现不了,按照合同要求全额退款。br/
一种大肠杆菌合成的新型疫苗佐剂
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本项目技术获得国家 “863” 、“973”计划及国家自然科学基金支持。 1、项目简介 MPL是Corixa公司商业化生产的的疫苗佐剂,在欧洲和澳大利亚应用于临床实验。研究表明,MPL只能激活TLR4-TRAM-TRIF信号转导途径,而不能激活TLR4-Mal-MyD88信号转导途径[34],因此只会诱导产生适量的细胞因子,而不引发严重的炎症反应。除MPL?外,其它结构类脂A分子,如单磷酸类脂A(MPLA),也能在降低自身毒性的同时保留免疫刺激能力,因此开发类脂A疫苗佐剂成为近几年研究的热点。 本实验室利用染色体基因敲除和整合技术,构建一系列能合成不同结构类脂A分子的大肠杆菌基因工程菌。其中HW001菌株能产生可用于疫苗佐剂的M-MPLA,通过TLC及ESI/MS鉴定,该菌株可合成单一的MPLA结构,在LPS免疫功能中起着重要作用。具有重要的应用前景,生产方法简单,利用简单的培养基即可实现M-MPLA的大量生产。此外,本实验室具有成熟的M-MPLA提纯工艺,可实现从菌株、发酵到纯化整个工艺的转让。 2、创新要点 MPLA结构可用于新型疫苗佐剂,具有自主知识产权。本项目技术具有菌株稳定、操作方便、无污染、投资少、建设周期短、成本低廉等优点。 3、效益分析 本技术采用大肠杆菌生产, M-MPLA是细胞的正常组分。因此发酵培养基、发酵动力成本较低,葡萄糖转化率较高,且分离成本简单、高效,因此在总投资较低情况下,可获得大量M-MPLA。图1 大肠杆菌类脂A生物合成途径 授权专利: 一种产Kdo2-lipid A的基因工程菌及其构建方法和应用 201410052649。8 一种产单磷酸类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210420986。9 一种产减毒类脂A的大肠杆菌基因工程菌及其应用 201210421431。6
L-异亮氨酸发酵高产菌种选育和发酵条件优化控制技术
成熟度:可规模生产
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
该项目利用代谢控制发酵理论分析了大肠杆菌中L-异亮氨酸的生物合成代谢途径,选育出一株具有蛋氨酸缺陷(Met-)、亮氨酸缺陷(Leu-)、赖氨酸缺陷(Lys-)、α-氨基丁酸(α-ABr)抗性及过表达天冬氨酸激酶(pSTV28-LysC)的L-异亮氨酸高产菌株,遗传性状稳定;对该菌的发酵条件进行了优化,50L发酵罐中发酵48小时,糖酸转化率达到15.8%,产酸量达到26.6g/L。发表论文3篇。
新型高效表达异源蛋白的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系 统
成熟度:通过中试
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
项目简介 异源蛋白质的高效分泌表达是蛋白质研究与生产中的核心问题,诸如表达水平低、分泌效率差等难点是制约酶蛋白、医药蛋白质等异源蛋白质研究与生产的主要瓶颈因素。大肠杆菌作为最为常用的异源蛋白质表达宿主具有诸多良好的特性,但同时也存在着免 疫原、内毒素、分泌表达效率低下等难以避免的问题,限制了下游工艺的成本降低与操 作的便捷性。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为革兰氏阳性菌的模式菌种,具有分泌表达、异源表达水平高(20-25 g/L)和安全等诸多优良特性,被认为是较理想的蛋白质生产菌株,从而广泛应用于各种酶蛋白的生产中。目前针对枯草芽孢杆菌的商业化表达系统 很少,国内更是缺乏具有自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统,且现有枯草芽孢 杆菌表达系统都存在着一些限制性因素,例如启动强度不足、诱导物价格昂贵、抗菌素 或抗生素等诱导物对细胞有毒害作用等,限制了其在扩大化生产中的实际应用潜力。 市场前景 目前蛋白表达系统市场上除 Agilent Technologies, Clontech, Life Technologies, Lonza, Merck, Millipore, Promega 等传统大型企业外,Dyadic International, Geneva Biotech,Greenovation, iBio, Jena Bioscience, New England Biolabs, Oxford Expression Technologies,Pfenex 及 Scarab Genomics 等中小型生物技术企业也积极着力开发新型蛋白质表达系统拓展市场。利用本项目研发的枯草芽孢杆菌 MATE 表达系统为企业在高效蛋白质表达方面提升科技研发能力,提升产品的市场竞争力,具有广阔的市场应用前景。 技术优势 截止目前,商业化枯草芽孢杆菌表达系统匮乏,且表达强度与大肠杆菌 T7 表达系统和毕赤酵母细胞甲醇诱导表达系统差距较大,不足以满足工业化蛋白质生产。新型MATE 表达系统拥有多种组合的"表达质粒-宿主菌株"搭配方案,可针对不同类型的目的蛋白进行胞内、胞外表达水平特异性优化。与传统基于大肠杆菌和毕赤酵母细胞的表达系统相比,本系统在保证高强度表达水平的基础上,具有与大肠杆菌相当的生长速度、菌体密度和生长条件(37℃发酵 24-54 小时),同时具有与毕赤酵母细胞相当的高效分泌能力,可以实现胞内及胞外高效表达,大幅简化下游回收纯化工艺。此外,作为 FDA 认证的 GRAS 生物安全菌株,枯草芽孢杆菌无内毒素及致病原,可用于食品级和医药级蛋白质产品的生产。 本系统筛选评价了多种枯草芽孢杆菌诱导型启动子,最终选择以麦芽糖诱导型启动子为基础,利用随机突变、定点突变手段进行建库筛选,获得了麦芽糖激活性/抑制性启动子突变体,并结合宿主细胞的遗传改造,构建了新型麦芽糖调控型表达系统 MATE (MAltose Triggered Expression system)。本系统诱导倍数可达 790 倍,实现了诱导物长效激活性(低诱导物成本)、高严谨性、良好的表达均一性和重复性;同时,本系统解除了糖类诱导物普遍存在的葡萄糖 CCR 抑制效应问题,可实现含葡萄糖培养基条件下的高强度诱导表达,极大拓展了系统应用范围。MATE 系统作为新型高效蛋白质表达系统, 已经实现 alpha-淀粉酶、beta-甘露聚糖酶、阿洛酮糖异构酶、beta-低聚半乳糖苷酶、肌酐酶、肌酸酶、DAA、绿色荧光蛋白、荧光素酶、人源成纤维细胞生长因子 FGF21 等多种酶蛋白及医药蛋白质的高效胞内表达或胞外分泌表达,目的蛋白表达量占细胞总蛋白比例达 60-70%,胞外目的蛋白表达量可达 80%以上;同时 MATE 系统可作为Gene Switch对目的基因进行诱导型 ON/OFF 精确调控,实现代谢途径的优化。 新型 MATE 蛋白质表达系统具有高表达、高分泌、食品级安全、调控手段灵活等优点,在酶蛋白、医药蛋白等高附加值蛋白质的表达和工业化生产方面具有十分广泛的应用潜力,同时填补了国内缺乏自主知识产权的高效枯草芽孢杆菌表达系统的问题。 研究阶段 MATE 系统包括不同性质菌株 3 株,不同诱导强度质粒 6 个,产品可以试剂盒形式直接销售,已经申请专利 5 项
高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及工业化关键技术
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
本科研团队利用Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生型大肠杆菌染色体上的ldhA、adhE、pflB、 poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因,结合进化代谢育种技术,筛选获得低盐条件下可高产琥珀酸非转基因大肠杆菌工程菌。所得菌株可利用NBS培养基和AM1低盐培养基,其成分主要为多种无机盐,成本远低于LB培养基;并且可以高效转化工业废弃玉米浆和葡萄糖结晶废糖液,目前在国内外尚属首例。所获得的工程菌,可在厌氧条件下发酵,48 h后琥珀酸产量达到92 g/L,糖酸转化率为89%,无杂酸生成。其中mgsA、aspC和sfcA基因敲除为国内首次敲除成功,我科研团队的研究已达到国际先进水平。所构建菌株无添加质粒,在发酵过程中不需加入抗生素等,菌株抗诱变能力强,发酵工艺简单,糖酸转化率较高为89%,且无杂酸生成。(6)我科研组提供所构建菌株,应用于工业生产,在提高工业生产琥珀酸产量的同时,可以降低工业成本(利用成本较为低廉的工业玉米浆等原料),提升琥珀酸的质量标准,为有机药物、石油等行业服务。(7)琥珀酸可作为绿色化学制品和材料的中间物质,具有广阔的应用前景。然而传统的化学法生产琥珀酸成本高,环境污染严重,无法达到可持续发展的要求。因此若能利用工业废弃物,高产琥珀酸则是现今的最热门的课题。 2012年本成果经湖北省科技厅鉴定为国际先进水平。