找到28项技术成果数据。
找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
找到28项技术成果数据。
找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
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找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
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找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
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找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
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找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
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找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。
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找技术 >一种海洋生物河豚毒素的胶体金快速检测试剂盒
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
背景技术中国鲎主要分布于日本的濑户内海和九州岛北岸,越南、西菲律宾的岛屿,苏门达腊和爪哇岛,马来西亚的北婆罗洲以及加里曼丹东岸等海域,在中国主要分布于长江以南的浙江、福建、广东、广西、海南以及台湾等沿海海域,现以福建、广东、广西、海南为多。圆尾鲎分布于中国香港、北部湾、雷州湾、印度尼西亚爪哇岛北岸以北、菲律宾南部以西和恒河河口印度东北部以东的海域。在中国的广东、广西常有食鲎中毒的事件发生。技术原理及性能指标步骤:1.标准贮备液配制,精密称量TTX 1.0 mg置于5ml离心管中,用1ml移液枪吸取1.0 mL浓度为0.2%醋酸,使其溶解后即得1.0 mg/mL的TTX贮备溶液,置于冰箱中保存;2.样品前处理,取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g,剪碎后加10mlpH=3.5浓度为0.1%醋酸于玻璃匀浆器中匀浆,充分匀浆后将样品置于烧瓶中,加50ml浓度为0.1%醋酸,然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟,边加热边搅拌,冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤,将滤液放入蒸发皿中,在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩,直至10ml,然后过滤定溶至10ml,将浓缩的滤液10ml放在离心管中,经10000r/min的速度,离心15分钟,取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后,放入干净离心管中,作为液相色谱待测液;3.液相色谱测试,醋酸流动相色谱条件固定相:SunFireTMC18色谱柱,直径4.6mm×长度150mm,进样量为20μ;流动相:0.2%醋酸;流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:210nm;柱温:25℃;每次进样体积为60μL;pH为3.0;磷酸流动相色谱条件 固定相:SunFireTMC18色谱柱,尺寸为4.6mm×150mm,进样量为20μl;流动相:0.05mol/L NaH2PO4-0.05mol/L Na2HPO4,pH=6.8,庚烷磺酸钠离子对5mM;紫外检测波长为200 nm;柱温:25℃。技术的创造性与先进性河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的神经性毒素,它最早从河豚鱼中分离出来的。近年来还发现河豚毒素不仅存在于河豚属的鱼类,还存在于虾虎鱼、章鱼、海星、蟹类以及腹足类,甚至还有鲎等众多的海洋生物中。它们不仅本身有较强的毒性而且可以通过食物链富集等途径,污染其他水产品,给人们食用这些水产品构成极大潜在危险。在东南亚河豚毒素中毒已经成为一个难题,一般都是因为摄取了河豚鱼导致的中毒。因为在日本河豚鱼被作为一道佳肴,所以大多数的河豚中毒事件都是发生在日本。另外,误食不明鱼种也是此类中毒事件发生的重要原因,因而加强对水产品中河豚毒素的监测显得尤为必要,多省地方渔业局已将水产品中河豚毒素作为常规检测项目。技术的成熟程度,适用范围和安全性河豚毒素的检测方法种类繁多,有生物测定法、理化检测方法、免疫化学测定方法等几大类。小鼠法是最常用和最简便的方法,廖永岩等也在2000年用小白鼠法检测了中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素,但此法具有定量不准确且重复性差等缺点。成果简介 本发明涉及检测中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的方法,包括以下步骤:标准贮备液的配制;样品的前处理;液相色谱测试。本发明采用高效液相色谱法检测中国鲎和圆尾鲎体内的的河豚毒素,以便证明鲎体内的毒素到底是不是含有河豚毒素,从而知道是食什么鲎引起食鲎中毒,为食鲎中毒的预防和治疗提供参考。
灿烂弧菌胶体金免疫层析试纸条及制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
本发明公开一种可快速检测刺参“化皮病”病原菌——灿烂弧菌的胶体金免疫层析试纸条及制备方法,有底板,在底板上从一端依次由上至下呈阶梯状地粘有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,所述金标垫上喷涂有胶体金标记的灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体,硝酸纤维素膜上有包被灿烂弧菌多克隆抗体的检测线a及由羊抗鼠IgG构成的质控线b,所述灿烂弧菌鞭毛蛋白FlgT单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.14311的杂交瘤细胞4A5免疫小鼠,得小鼠腹水经纯化制备而成。
副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业,农、林、牧、渔业
技术简介
项目简介: 本发明涉及一种副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤:a)副溶血弧菌抗原的制备;b)制得副溶血弧菌灭活疫苗;c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清;d)抗血清纯化;e)胶体金标记;f)免疫金试纸条的制备。采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术,具有简单、灵敏、快速、特异等优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时该检测试纸具有价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。 项目核心创新点: 本发明旨在以副溶血性弧菌为材料,制备多抗,利用先进的胶体金生产工艺来研制检测副溶血性弧菌标检测试纸。为了实现上述目的,本发明的解决方案如下: 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,包括以下步骤: a)副溶血弧菌抗原的制备:用蛋白胨水培养基将副溶血弧菌培养过夜; b)制得副溶血弧菌灭活疫苗; c)用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清:采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,分别得到皮下多点注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-1,下同)和静脉直接注射制备的兔抗副溶血弧菌抗体(简称为兔抗-2,下同); d)抗血清纯化; e)胶体金标记:将纯化的兔抗血清胶体金进行标记; f)免疫金试纸条的制备:先将步骤d)中纯化的兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,再将步骤e)中制备的胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,然后组装成免疫金试纸条。 所述的步骤b),制得副溶血弧菌灭活疫苗,具体为:先经过0.3%的甲醛37℃灭活24h,然后经培养检测确实无活菌后作为抗原。 所述的步骤c),用疫苗免疫实验兔制备多价抗血清,采用皮下多点注射和静脉直接注射免疫兔子制备兔抗副溶血弧菌多抗抗体,具体为: 1)静脉注射免疫:每10天注射一次,首次1mL,第二次1.5mL,第三次2mL,第四次3mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血; 2)弗氏佐剂皮下多点注射免疫:弗氏完全佐剂与菌液等体积混合后,兔颈背部皮下多点注射4mL,2周后,用弗氏不完全佐剂与菌液等体积混合液颈背部皮下多点注射4mL,2周后,采血前5-7天静脉注射4mL,当效价达到1:1280或1:2560时放血。 所述的步骤f),免疫金试纸条的制备,具体为: 用胶体金标记兔抗-1,建立胶体金免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法;应用微孔滤膜作载体的免疫检测技术,先将兔抗-2喷在微孔滤膜检测线上,羊抗兔抗体喷在对照线上,胶体金标记的兔抗-1喷在玻璃纤维膜上,干燥后加入封闭液混合,烘干液体后组装成检测副溶血弧菌;再通过金颗粒放大免疫反应系统,使反应结果在固相载体微孔滤膜上显示出来。 上述封闭液配方采用:含有1%(W/V)酪蛋白和0.05%(V/V)Tween -20的浓度为0.01 mol/L的PBS溶液,PBS溶液的pH值为7.2。 副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的制备方法,其特征在于,所制备的免疫金快速检测试纸用于现场检测时,将试纸条平放在桌面上,在加样端加上100uL的样品,样品首先溶解喷在玻璃纤维膜上的金标兔抗-1,然后溶液往NC膜移动,当遇到检测线(T)的兔抗-2时,判断试纸检测结果的标准如下: 样品中含有副溶血弧菌:在检测线和对照线(C)上均显现一条紫红色线(形成夹心反应,即金标兔抗-1—副溶血弧菌—兔抗-2); 样品中不含有副溶血弧菌:只在对照线上出现一条紫红色线; 试纸无效:检测线和对照线上均不出现一条紫红色线。 本发明的有益效果如下: 采用本方法副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的操作简便、快速,不需特殊仪器设备,检测线上的紫红色反应线色泽鲜艳,易于判断,且检测结果可以保存。通过应用该试纸条法对150份样品的检测,结果试纸条法阳性率为2%,细菌分离检测阳性率为2%,两者符合率达100%。本发明选用的副溶血弧菌抗原免疫原性好,免疫兔子制得的抗体凝集效价达到211- 212,用胶体金标记组成检测试纸条用于检测副溶血弧菌,具有特异性强,灵敏性高,操作简单,耗时短,结果易于判断,且与溶藻弧菌、大肠杆菌、沙门氏菌、哈维氏菌和不发生交叉反应。该方法的成功研制,能够简单快速检测副溶血弧菌。 项目详细用途: 副溶血性弧菌属弧菌科弧菌属,是通过食物、水传播的病原菌,具有生物学特性和同样的致病性,可引起腹泻和食物中毒。 副溶血弧菌最早是由Fujino等于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的,又称嗜盐菌,该菌因在含食盐较浓(3%~4%以上)的培养基中能生长,而在不含盐的培养基内不能繁殖而得名。副溶血弧菌分布于世界各地,通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中,人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品如蟹类、牡蛎!虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒,在细菌性食物中毒中占的比例很高,其危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。人中毒后的基本症状包括:腹泄(呈水样便或血样便)、腹部痉挛、恶心、呕吐和头疼,也曾有发烧和发冷的报道,但较少。 目前,美国和欧盟对进口水产品都强制性要求进行副溶血弧菌的检测,检验结果为阴性方可通关,否则出口的水产品将被全部自动扣留或就地销毁。这给我国水产品的出口设置了技术壁垒。因此,出口水产品加工厂认真贯彻HACCP计划,加强对副溶血弧菌的检测,检疫部门加强对工厂落实HACCP计划情况的监管和对出口水产品的检验就显得尤其重要。 目前,国内对于副溶血性弧菌的检测已经有了相应的国家标准和行业标准,方法大致分为以下几个过程:(1)前增菌;(2)选择性增菌;(3)选择性培养;(4)生化鉴定;(5)神奈川现象和血清学实验。检验过程需要5d-6d才能报告阳性结果。检验方法繁琐,费时费力,不仅影响检验机构的工作效率,而且使生产部门的产品运输和仓储时间延长,生产成本加大。 胶体金快速诊断试纸法是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。操作简单,仅须将待检样品滴加到样品槽中即可,过10几分钟就可根据颜色判断结果,达到检测的目的。该方法不需要特殊的仪器,一般技术人员即可完成,而且检测成本低,可大大减少工作量,适应于口岸快速检测的需要。因此,尽快建立一套快速检测副溶血性弧菌的准确、可靠、科学的胶体金快速诊断试纸法势在必行。这对于加强进出口水产品中弧菌的快速检验检疫、水产养殖病害的调查和防治、无公害水产品检测和生产以及水产品卫生质量监督检验等方面都具有十分重要的意义。 有鉴于此,本发明提供一种副溶血弧菌的免疫金快速检测试纸的制备方法,以建立简便、快速的检测方法。 预期效益说明: 采用本发明副溶血弧菌免疫金快速检测试纸的检测技术具有简单、灵敏、快速、特异的优点,能大大方便口岸进出口货物的通关速度,同时由于该检测试纸价格低廉、不需要仪器设备、操作简便快速、结果容易判断。这对于预防和控制我国水产品安全具有重要的现实意义。目前未见国内外利用免疫胶体金技术检测进出口水生动物及其产品中副溶血性弧菌的报道,该技术有望为出入境副溶血性弧菌的检测提供一种快速灵敏、简便可靠的方法,特别适合口岸检疫部门实施快速验放需要,具有较好的社会效益和经济效益。
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法
成熟度:通过小试
技术类型:-
应用行业:农、林、牧、渔业
技术简介
猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法。 成果简介:猪流感的感染通常降低机体抵抗力,从而增加猪对其它疫病的易感性。而且猪流感的排毒周期比较短,因此研制便于现场栏圈边使用的快速、灵敏的试剂盒具有重要价值和意义。针对于此,通过对猪流感病毒H3亚型的HA蛋白序列进行进化分析,筛选出了两株遗传进化关系较远并且具有代表性的猪流感病毒H3亚型毒株GD3和HN3,制备了H3型猪流感病毒的高效价、高特异性单克隆抗体,对H3亚型流行毒株的覆盖率较高。研制出能广泛识别猪流感病毒H3亚型的胶体金检测试剂盒,具有很高的特异性和敏感性。 应用前景:猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒能检测病毒尿囊液及临床猪鼻拭纸病料,具有敏感性高、特异性强,检测方便快捷的特点,非常适合圈栏边使用。本研究制备的胶体金检测试剂盒具有很好的稳定性及可重复性,为临床检测猪流感病毒H3亚型提供了新途径。
糖尿病肾病早期诊断试剂盒
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
p 项目简介目前全世界糖尿病患者4.25亿,我国糖尿病患者占全球的25%,约1.09亿,其中超过1/3的糖尿病患者会罹患糖尿病肾病。糖尿病患者一旦发生肾脏损害,出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转,往往发展至终末期肾衰竭。因此,寻求早期诊断和有效治疗是临床和基础研究共同关注的问题。尿白蛋白的出现是目前临床上最早可检测阶段,但是一旦出现临床蛋白尿,肾功能将呈进行性下降。糖尿病伴微量蛋白尿患者是否诊断为糖尿病肾病存在分歧,仅查尿蛋白排泄率可能漏诊慢性肾脏病。糖尿病肾病需要早期筛查指标关键技术团队发现一种特异性的引起肾脏早期损伤的AGEs自身抗体,自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击,针对AGEs的自身抗体在疾病发生不同阶段识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的特异AGEs,从而引起肾损伤,导致糖尿病肾病。基于此,团队推测这类自身抗体可用于糖尿病肾病的早期诊断。参照常规的ELISA方法,开发出基于特异AGEs的自身抗体的糖尿病肾病早期诊断盒。检测时,罹患糖尿病肾病的患者血清中将含有针对特异AGEs的自身抗体,将和包埋的特异AGEs结合,从而被带有化学发光基团的第二抗体识别,呈现颜色。利用免疫层析双抗体夹心法,开发出基于特异AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断试纸。检测时,糖尿病肾病患者血清样本虹吸通过胶体金标记AGEs时,针对AGEs的自身抗体会与试纸上的抗体形成胶体金复合物,复合物继续爬行,通过包被的第二抗体时,形成双抗体夹心胶体金复合物,在包被线处呈现色带,过量的胶体金抗体继续爬行,和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物,呈现色带;如果被检糖尿病患者没有罹患糖尿病肾病时则患者血清中不会含有针对特异AGEs的自身抗体,当血清样本通过试纸检测是就不会呈现色带。img title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片79.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535307396030.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片80.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535241573563.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片81.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535454958044.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片82.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1535517759148.png"/ /ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片83.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536034932217.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片84.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536098398739.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片85.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536155929223.png"//ppimg title="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" alt="e:\k8008\qiuchengcai\桌面\南京成果图片\糖尿病\图片86.png" src="https://ue-upload.1633.com/2020/0408/1536061552348.png"//p
肝癌双标记物胶体金检测试剂盒项目
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
2014年4月24日,杭州市科学技术委员会委托杭州经济技术开发区科学技术局组织专家召开了由杭州普望生物技术有限公司与浙江大学合作承担的市产学研项目“肝癌双标记物胶体金检测试剂盒”(项目编号:20112731E92)验收会。验收组听取了项目工作、技术总结报告,审查了相关资料等。经讨论,形成验收意见如下:提供验收的资料基本齐全、规范,符合验收要求。该项目采用胶体金联合检测免疫识别技术,完成了C、M检测工艺包被、标记、干燥等工艺技术等内容,达到了既定的目标并能良好区分正常人和肝癌病人的效果。项目相关技术申请发明专利2项,授权实用新型专利2项。产品经浙江省医疗器械检验院检测(报告编号:Z20140477),性能指标基本达到合同书要求。该项目计划总投资500万,经公司内部审计,项目实际总投资402.36万元,其中市、区科技拨款各7.5万元,经费到位及时,使用基本合理。验收组认为:该项目基本完成了合同书规定的主要任务,基本同意通过验收。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
专利简介::一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条,包括PVC底板,所述的底板一端设置有样品垫,样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接,硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接,所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体——胶体金标记物,所述的硝酸纤维素膜上设置有一条包抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的检测区和一条包被羊抗鼠二抗的对照区,采用这种结构的试纸条具有特异性强,操作简便、快速,结果显示直观、准确,减少投资和检测成本,应用范围广等优点,能广泛应用于基层对于坦布苏病毒的检测。
快速检测转Bt基因作物抗性用胶体金免疫层析试纸
成熟度:正在研发
技术类型:-
应用行业:制造业
技术简介
一种快速检测转Bt基因作物抗用胶体金免疫层析试纸,利用胶体金免疫层析技术在短时间内检测鉴定转Bt基因作物的抗性。该试纸条是在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴金标兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体玻璃纤维素膜,质控线侧贴吸水纸。其中检测线为兔抗Bt毒蛋白多克隆抗体,质控线为羊抗兔IgG。检测时用碳酸缓冲液为样品缓冲液,加入体积为150μl,若试纸条质控线上出现紫红色为阴性结果,在质控线和检测线均出现紫红色者则为阳性结果。本发明操作极其简便,检测周期非常短,特别适合基层部门及野外作业。
一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明涉及电化学技术领域,具体公开了一种测定色胺的胶体金/粘土修饰电极及测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法。所述的修饰电极的制备方法为将胶体金/粘土复合物溶液涂覆在工作电极的表面,干燥后即得。所述测定米醋、白酒或酸奶中色胺含量的方法为使用上述胶体金/粘土修饰电极,采用电化学测定方法进行测定。实验证明,由本发明方法制备得到的胶体金/粘土修饰电极的灵敏度高以及选择性好;所述的电极用于市售米醋、白酒或酸奶中色胺含量的检测,具有方便快捷、易于操作、成本低、测试灵敏度较高、选择性好等优点。