找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
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应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
找到4项技术成果数据。
找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。
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找技术 >小鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为雄性生殖细胞的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
近年来不孕不育症发病率逐年增加,辅助生殖技术是不孕不育症最为有效的治疗方法,但是对于非梗阻性无精症患者目前尚无有效的办法使其生育自己的孩子,不能成为遗传学上的父亲。为了这些患者能够具备生育的能力。我们进行了脂肪间充质干细胞(ADSCs)诱导分化为雄性生殖细胞的研究。(1)mADSCs的培养和鉴定:首先从表达GFP蛋白的绿色荧光C57小鼠脂肪中分离培养了脂肪间充质干细胞,体外可以稳定传代30代次,经过细胞生长曲线、染色体分析、细胞表面特异标记基因表达、细胞三胚层诱导分化,证明培养的细胞具有脂肪间充质干细胞性质,且有多向分化潜能。(2)mADSCs诱导转分化为ips的研究:将ADSCs经过小分子化合物VPA、CHIR99021、616452、Tranyl -cypromine、Forskolin、AM580、EPZ004777以及DZNep、5-aza-dC、SGC0946的不同组合三步法贯续诱导,长梭形的ADSCs细胞逐渐变圆,呈上皮细胞样克隆,经第二步诱导后,细胞间隙变小,进一步致密,逐渐形成类似于胚胎干细胞样的克隆;这些克隆细胞碱性磷酸酶阳性,RT-PCR和免疫组化检测在诱导的初期,胚外内胚层标志基因SALL4、GATA4、SOX17表达,在诱导的后期,干细胞表面标志基因Oct4、Nanog、 SOX2均在ips克隆细胞中表达,且与文献报告的成纤维细胞诱导分化为ips的结果一致。(3)mADSCs来源的ips诱导分化为原始生殖细胞和精原干细胞、精子的过程:通过添加BMP4、SCF、BMP8a及Lif诱导ips细胞转分化为原始生殖细胞;继续通过添加视黄酸和ActivinA原始生殖细胞进一步分化为精原干细胞以及精子细胞,RT-PCR检测这些细胞表达DAZL、VASA、Star8、Blimp1及C-Kit等雄性生殖细胞关键基因。(4)对于mADSCs和诱导分化形成的精原干细胞进行转录组测序和lncRNA测序,利用生物信息学对两种细胞基因表达和调控进行了比较分析。筛选标准为|logFC|>2,p 值<0.05,最终筛选得到1288 个上调差异基因及 816 个下调差异基因。Go分析结果(Table1)显示在生物过程中,上调的差异基因主要与调控细胞粘附,细胞迁移,炎症反应,多细胞机体及细胞分化等相关;下调的差异基因主要涉及干细胞库维持,细胞氨基酸生物合成过程,RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控,干细胞的分化及神经管闭合等,与细胞功能的差异相符。(5)利用腹腔注射白消安制备了无精症小鼠、大鼠模型,注射白消安后,睾丸体积减小,重量减轻,组织学检测HE染色可见睾丸曲细精管中精原干细胞消失,仅间少量支持细胞;曲细精管呈空洞状,免疫组化染色精原干细胞标志基因c-kit不表达,证明成功建立了无精症动物模型;将体外培养的脂肪间充质干细胞注射到无精症小鼠睾丸曲细精管中,30d后观察,睾丸增大,与对照组比较无显著性差异,睾丸组织切片经HE染色后观察可见,睾丸曲细精管中有新的细胞生成,免疫组化染色细胞中c-kit基因表达,初步说明,ADSCs在体内能够诱导分化为雄性生殖细胞。(6)体外分离培养了人的脂肪间充质干细胞(hADSCs),进行了生物学性质检测,可以诱导分化为ips细胞。本研究对间充质干细胞转分化为雄性生殖细胞技术体系的建立以及深入探讨精子发生机理具有重要意义;为雄性生殖细胞的损伤修复和再生奠定了基础;对于非梗阻性无精症患者的生育提供了新的方法学。
大鼠脂肪间充质干细胞对肾移植免疫调节机制的研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
研究工作主要进展和所取得的成果(主要关键技术与创新点,主要技术与经济指标完成情况,项目实施的绩效等,包括代表性成果介绍,说明其水平和影响,并简要阐述其科学意义或应用前景等。) (1)关键技术与创新点:取大鼠附睾处脂肪组织在体外分离培养了脂肪间充质干细胞,经特异基因检测和定向诱导分化实验证明我们培养的是脂肪间充质干细胞。 经过脂质体介导将表达绿色荧光蛋白的真核表达载体 pEGFP-1成功转染到脂肪间充质干细胞,得到表达绿色荧光蛋白的 ADSCs,在细胞移植治疗中能够方便、简洁地区分供体、受体细胞。 在实验方法和技术上具有一定的创新性。(2)主要技术与经济指标完成情况:①在体外成功分离培养了大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)②通过转基因技术得到表达绿色荧光蛋白的ADSCs③成功建立了大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)模型④通过大鼠尾静脉注射将转基因 ADSCs细胞移植到肾损伤大鼠体内,血清肌酐、血尿素氮检测和病理组织学证明细胞移植治疗减轻肾小管上皮细胞的损伤程度,但是在肾组织并没有检测到绿色荧光细胞,初步说明 ADSCs的治疗作用可能是通过分泌细胞因子等旁分泌途径,而不是ADSCs直接分化形成肾组织细胞。 (3)项目实施的绩效:①通过项目实施,发表核心期刊文章1篇,已收录文章1篇。②培养硕士研究生2名,其中1名于2015年毕业(张伟)。 (4)科学意义和应用前景:通过建立大鼠脂肪间充质干细胞体外培养技术体系,并通过转基因技术得到表达绿色荧光的 ADSCs,为异体移植中细胞进行了荧光标记,在细胞治疗中能够更好地区分供体、受体细胞,在动物实验研究中具有非常重要的意义。同时制备了肾损伤大鼠模型,进行了荧光细胞的异体治疗,对治疗效果和作用机制进行了初步研究,该研究结果为泌尿外科肾损伤和肾移植的干细胞治疗提供了理论依据和实验基础,研究内容具有创新性和重要的应用价值,研究成果达到了国内先进水平。
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
摘要:本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究
成熟度:-
技术类型:-
应用行业:卫生和社会工作
技术简介
提高脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化能力的实验研究成果属于生物医药与医疗器械领域,主要应用于卫生与社会工作行业中。该成果来源于青岛市产学研合作计划项目中的应用基础研究计划,由青岛市科技局资助,项目编号:12-1-4-16-(5)-jch,成果立项日期为2012年01月,结题日期为2014年09月。目前该成果发表论文[1-6]6篇,其中SCI收录论文[6]1篇,已录用SCI论文[7]1篇,授权国家发明专利[8-19]12项,授权国家实用新型专利[20-25]6项。 该成果在无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。该成果首次利用胰腺损伤提取液诱导脂肪间充质干细胞,并对诱导后细胞进行DTZ染色,糖刺激实验检测胰岛素分泌量,免疫荧光染色检测PDX-1和insulin 1的表达量。 该成果验首次将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞内。通过PDX-1基因的转染诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛养细胞分化。随后免疫荧光染色检测PDX-1表达,双硫腙染色以及ELISA检测胰岛素表达。 该成果通过腺病毒携带PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞、利用细胞因子诱导,以及利用胰腺损伤提取液诱导干细胞的方式,诱导其向胰岛素分泌细胞的方向分化,证明PDX-1 基因、细胞因子以及损伤提取液对人脂肪间充质干细胞的诱导分化具有促进作用。其可提供脂肪间充质干细胞衍生来源的胰岛素细胞进行细胞替代疗法,在未来I型糖尿病治疗方面具有广阔的研究前景和应用价值。