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找技术 >一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体及其应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体,其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上,第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列;或者,第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高,达到野生型的179%或223%,而且温度稳定性也得到了显著改善,突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。
一种差向异构酶的突变体及其应用
成熟度:正在研发
技术类型:发明
应用行业:制造业
技术简介
本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法,酶的突变体的构建方法为:以来自于球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本,通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的(第105位氨基酸残基)缬氨酸变成异亮氨酸;之后构建表达载体,以E.coli BL21(DE3)为异源表达宿主获得酶的突变体。 活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h,70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。 本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖,为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景,具有重要的工业应用价值。
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本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法,酶的突变体的构建方法为:以来自于球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本,通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的(第105位氨基酸残基)缬氨酸变成异亮氨酸;之后构建表达载体,以E.coli BL21(DE3)为异源表达宿主获得酶的突变体。 活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h,70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。 本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖,为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景,具有重要的工业应用价值。
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本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体,其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上,第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列;或者,第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高,达到野生型的179%或223%,而且温度稳定性也得到了显著改善,突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。
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本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法,酶的突变体的构建方法为:以来自于球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本,通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的(第105位氨基酸残基)缬氨酸变成异亮氨酸;之后构建表达载体,以E.coli BL21(DE3)为异源表达宿主获得酶的突变体。 活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h,70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。 本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖,为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景,具有重要的工业应用价值。