功能蛋白质制备和筛选技术

行业生物药品制品制造

成熟度正在研发

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技术项目简介

 


  一、目标蛋白质的分离纯化技术


  激肽释放酶是一组糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶家族下的一个亚类,在人体的许多部位广泛表达。它通过与其它血管活性物质的作用参与肾脏功能的调节,包括扩张肾内小动脉、增加肾血流量、扩张外周血管、增加血管通透性、降低血压和促进电解质及葡萄糖的转运。此外,作为一种活化因子,它能使纤维酶原激活成纤维酶,将不溶性的纤维蛋白酶水解成可溶性的小肽,从而对脑梗塞、动脉粥样硬化等疾病起到预防和治疗的作用。


  课题组首次在重组分子杆状病毒-昆虫细胞系统中高表达了人组织激肽释放酶原。建立了基于液相色谱多种模式的表达蛋白的分离纯化方法,探索了规模化生产工艺,为组织激肽释放酶原的大规模制备奠定了基础。


  二、药物靶蛋白质的筛选技术


  药物蛋白质靶点分析对于阐明生理或病理发生、发展过程及调控机制,研究药物作用机理、评估药物安全性、新药研发及优化治疗手段等方面具有重要意义。随着人类基因组学和蛋白质组学的迅速发展,大家发现潜在的药物蛋白靶点可能在3000到10000个之间,这还不包括后翻译修饰蛋白、蛋白异构体以及变异蛋白,而目前已发现的药物靶点蛋白还不到500个。因此开发高通量药物靶点筛选新方法对寻找更多潜在的药物靶点蛋白质意义重大。


  针对水溶性抗癌药物氨甲喋呤,发展了药物靶蛋白筛选方法,从人肺癌小细胞系H446细胞提取蛋白质中选择性富集了31个潜在的药物靶蛋白,并对其中29种蛋白质的功能进行了分析。


  针对非水溶性药物靶蛋白的选择性富集,发展了直接以非水溶性药物颗粒为探针和探针载体的方法。以地塞米松为药物小分子,从人肺癌小细胞系H446细胞提取蛋白质中选择性富集了47个药物靶蛋白,并通过生物信息学分析,建立了蛋白质相互作用网路,并发现鉴定到的蛋白质参与了嘧啶代谢通路和帕金森病代谢通路。


  三、鹿茸活性蛋白的筛选及功能研究


  鹿茸是哺乳动物唯一能够完整持续再生的器官。鹿茸的生长与脱落在90天左右的时间,可以认为这是附属在哺乳动物的相对独立的器官的一个生命周期,再现了基因指导下的在颅骨固定区域的干细胞的分化、发育,到高速按程序的协调生长、凋亡及脱落的过程。研究这一过程的生物学机制,对人类生命各阶段的生长、发育、衰老及与衰老相关的病变过程有非常重要的意义。


  课题组针对不同生长时期鹿茸,发展了蛋白质活性提取方法,以人剂静脉上皮细胞作为细胞模型,研究了不同生长时期、不同部位鹿茸提取蛋白对人剂静脉上皮细胞的影响,发现了鹿茸提取蛋白对其具有明显的增值作用。


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