1、课题来源与背景 本课题《MCM2 蛋白在膀胱癌组织中的表达及其临床意义》是2007 年清远市科技局重点资助项目,项目编号2007-5-6,课题组负责人是莫鉴锋,主要成员有曾健文、吴小伟、钟国权、胡国洪、邵琳、龚国毅、周理林、曾鹏、杨曦等。 膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率在逐年增加。诊断膀胱肿瘤传统方法是膀胱镜检及组织活检,超声和CT 等影像检查可作为辅助。但存在早期诊断敏感性不高、易漏诊的缺点。尿脱落细胞学检查有一定的假阳性和假阴性,特别是假阴性较高。因此,临床应用价值有限。寻找有效的肿瘤分子标志物是肿瘤研究的方向之一,微小染色体维持蛋白是近期研究发现的一种细胞增殖相关因子,是DNA 复制的许可因子。MCMP 是由六个亚基构成的六聚体环状蛋白质,即MCM2-7,由CDC(cell division cycle)基因编码。MCM2P是其中一个亚型。MCMP 只在处于增殖活动周期的细胞内表达,MCMP 不表达则意味着细胞已退出细胞增殖周期,成为分化成熟的细胞或进入G0 期,这提示MCMP 可作为增殖细胞的特殊标志物。有学者发现MCMP 表达与肿瘤细胞分化程度相关,细胞分化程度越低,MCMP 表达越明显。KI-67 与PCN 也是细胞增殖相关因子,也可用于肾癌、膀胱癌、前列腺癌的诊断及预后。但KI-67 的功能争议较大,且表达易受细胞外因素影响(如细胞营养的缺乏);PCNA 也可出现于DNA 损伤修复时,且PCNA 染色影响因素较多(如固定时间等),影响检测结果的客观性。MCMP 与KI-67、PCNA 不同,是DNA 复制的许可因子,较少受内、外因素影响,2、技术原理与性能指标 (1)技术原理 本课题研究主要运用免疫组织化学及PCR 技术从三方面探讨MCM2 在膀胱癌中的作用。主要表现在:通过免疫组织化学的方法检测MCM2 在膀胱癌组织中的表达情况,分析MCM2 表达与临床病理参数之间的关系及其对膀胱癌患者预后的评估价值;通过RT-PCR 方法检测MCM2 在膀胱癌组织标本和尿脱落细胞标本中的表达,以探讨其在膀胱癌诊断中的应用价值。通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测膀胱癌、腺性膀胱炎和正常膀胱黏膜中MCMP2 mRNA 的表达并探讨MCMP2 在膀胱肿瘤早期诊断中的意义。 (2)性能指标 主要通过免疫组织化学的方法检测MCM2 在膀胱癌组织中的表达情况,分析MCM2 的表达强度与膀胱癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、是否复发关系之间的关系及其对膀胱癌患者预后的评估价值;通过RT-PCR 方法检测MCM2 在膀胱癌组织标本和尿脱落细胞标本中的表达,以探讨其在膀胱癌诊断中的应用价值,比较尿脱落细胞中MCM2 检测和尿细胞学诊断膀胱癌的临床价值;通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测膀胱癌、腺性膀胱炎和正常膀胱黏膜中MCMP2 mRNA 的表达并探讨MCMP2 在膀胱肿瘤早期诊断中的意义。实际研究结果提示 (1)、该研究提示:膀胱癌组织中MCM2 表达明显上调,并能反映膀胱癌的浸润、转移力,MCM2 检测对判断膀胱癌的发展及预后具有一定的意义。 (2)、该研究应用RT-PCR方法检测膀胱癌组织及尿脱落细胞组织中MCM2 表达是一种敏感、特异的膀胱癌诊断方法,较传统尿脱落细胞找癌细胞阳性率高。 (3)、通过检测膀胱组织中MCM2 的表达可评估腺性膀胱炎的恶变,有助于膀胱癌的早期筛查。 3、技术的先进性与创造性 本研究采用RT-PCR 技术及免疫组织化学方法,从MCM2-RNA 和蛋白质水平,定量、定位检测MCM2P 在不同组织中的分布及表达特点,并检测尿脱落细胞中MCM2 的表达。并得出膀胱癌组织中MCM2 表达明显上调,并能反映膀胱癌的浸润、转移力,MCM2 检测对判断膀胱癌的发展及预后具有一定的意义。通过检测膀胱组织中MCM2 的表达可评估腺性膀胱炎的恶变,有助于膀胱癌的早期筛查。并在国内首次提出应用RT-PCR 方法检测膀胱癌组织及尿脱落细胞组织中MCM2 表达是一种敏感、特异的膀胱癌诊断方法。通过本研究预期MCM2 可作为膀胱癌及尿脱落细胞的一种肿瘤标志物,具有非常重要的临床意义。 4、技术的成熟程度、适用范围与安全性 本技术成熟程度较高,相关检测技术在很多医院都可以开展。主要适用于膀胱癌的早期诊断及判断预后,也可以用于膀胱癌的诊断及鉴别诊断。本技术安全性较高,对人体及环境无害。 5、应用情况及存在问题本课题相关研究结果现已在临床推广应用,研究成果已在海南省人民医院、中山大学第三附属医院、广州市第一人民医院、东莞市人民医院、清新县人民医院、连南县人民医院等省内外多家医院推广应用。取得了良好的经济效益和社会效益,可见该项成果具有广阔的发展前景,有非常好的实用性和推广性。 (二)、存在的问题及改进意见 (1)本研究病例数偏少,样本量不够大,可能会造成研究结果存在偏差,在下一步的研究中应加大样本量,行多中心的临床研究。 (2)MCMP 有多个亚型,在下一步的研究中应探讨MCMP 不同亚型的表达与肿瘤细胞分化程度的相关性。