中医中药几百年治疗心血管疾病已有丰富临床经验,丹皮酚（Paeonol,Pae）是很多中药含的活性成分,在改善血液循环、抗心律失常、抗心肌缺血、扩张血管和抗动脉粥样硬化等广泛的药理作用,过去研究发现丹皮酚还具有抗动脉粥样硬化的作用。但是从细胞分子学和病理基础以及发病机制的研究不多,尤其是对血管再狭窄的基础研究更少,本课题是针对目前经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention, PCI）明显增加,虽然已是药物支架应用血管再狭窄有所减少,但实际上血管再狭窄临床个案也不少,西药对再狭窄研究不多,而中药丹皮酚对血管再狭窄研究报道就甚少,丹皮酚具有抗血管平滑肌细胞增殖的作用。相关研究大部分都是体外研究,其机制主要是通过抗炎、抗氧化、抗细胞间粘附分子而起抗细胞增殖作用,关于丹皮酚体内抗血管平滑肌细胞增殖的研究报道得甚少,其细胞分子学机制目前尚未明确。2012年开始按市科技项目计划,应用丹皮酚对血管再狭窄做了一系列研究,现总结如下：① 首先通过动物建模和分组（动脉粥样硬化模型和动物球囊扩张法扩张腹主动脉再狭窄模型）;兔子按完全随机法分为4组（A组、B组、C组、D组）,每组6只,分别给予生理盐水2ml/kg/d、低浓度丹皮酚75mg/kg/d、高浓度丹皮酚150mg/kg/d、雷帕霉素1.25mg/kg/d灌胃,每天灌胃一次（10ml/kg-1）,连续六周给药,每周称重1次,以调整给药剂量。以后研究中增加西药氨氯地平对比组,和不同剂量的复方丹参滴丸组以及联合阿托伐他汀组等作对比研究。② 血管平滑肌细胞培养（研究细胞各期如细胞周期分为：DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）与M期（细胞分裂期）、G0期（停止细胞分裂）。加入丹皮酚与雷帕霉素的干预后多个调控点的研究,表明丹皮酚具有抑制家兔血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及对细胞周期的调控,Pae可以通过增加G0/G1期细胞所占比例和减少S期细胞所占比例阻止VSMCs细胞周期由G0/G1期向S期推进。其作用机制可能是丹皮酚参与了G1期周期蛋白及CDK的表达,使细胞阻滞于G1- S限制点,从而抑制滑肌细胞增殖。研究发现上调对PCNA和P27kip1的表达水平等有关,也能明显抑制内膜细胞bFGF表达,从而达到抑制内膜细胞增殖,利用基因芯片技术检测用药前后,再狭窄血管的基因表达谱,发现Pae的这个作用可能是通过抑制RAS-RAF-MAPK信号通路实现的。③ 通过病理改变再探讨丹皮酚抗动脉硬化（RS）机制,本研究后期还增加复方丹参滴丸（CDDP）是我国第1个通过了美国FDA临床用药申请的中成药物, 研究认为复方丹参滴丸能抑制血管内膜增殖,所以增加观察不同剂量的CDDP与氨氯地平做比较,探讨抑制兔球囊损伤腹主脉再狭窄的疗效,以及探讨其可能的作用机制。结果发现高低剂量复方丹参滴丸组bFGF阳性细胞表达量明显低于对照组,说明CDDP能明显抑制内膜细胞bFGF表达,从而抑制内膜细胞增殖,它的这个作用可能是通过抑制RAS-RAF-MAPK信号通路实现的,但CDDP的这个作用不呈剂量依赖。CDDP能够显著降低模型兔血脂TC、TG、LDL-c水平,升高HDL水平,从而延缓血管动脉粥样硬化的进展,大剂量CDDP的调脂效果比氨氯地平更显著（P＜0.05）。以后又增加了用西药阿托伐他汀和联合应用干预研究,探讨其疗效及抗RS的机制。结果发现复方丹参滴丸可抑制NF-kB,减少由其诱导的MCP-1的表达来抑制血管平滑肌增殖。阿托伐他汀联合复方丹参滴丸抑制血管平滑肌增殖优于单用复方丹参滴丸或阿托伐他汀,复方丹参滴丸联合阿托伐他汀是冠心病尤其是PCI术患者的更好选择。为临床提供理论依据。本研究发现丹皮酚具有显著降低血脂水平以及降低炎症因子水平,起到保护血管内皮的作用。丹皮酚能抑制球囊损伤后血管内膜增殖的作用,这与其能够降低PCNA的表达,上调对PCNA和P27kip1的表达水平等有关,也能明显抑制内膜细胞bFGF表达,从而抑制内膜细胞增殖,它的这个作用可能是通过抑制RAS-RAF-MAPK信号通路实现的,通过病理切片HE染色光镜与免疫组化染色图像光镜分析也证实了丹皮酚优于其它药物）。④ 课题研究按计划完成,共培养三批5个研究生,和发表国家级论文2篇（见复印件）,其中一篇SCI复合影响因子0.59,《中医杂志英文版Journal of Traditional Chinese Medicine》,2015年第三期录用和排版。存在问题：研究没能采用兔颈动脉制作球囊扩张后再狭窄模型,国外文献一般采用兔或大鼠颈动脉制作血管成形术后再狭窄模型,因颈动脉在血流动力学及血管结构方面与人的冠状动脉更加接近。其次由于经费原因没能够在介入室DSA机下行狭窄段血管的球囊扩张,使得实验结果不够完美,也没有进行靶向治疗研究。再次在血管内膜增殖的细胞信号通路研究较为单一,需多条细胞信号通路进行研究。
黄教授
