摘要
图 1. a) TA-siRNA 纳米凝胶的廷德尔效应和 b) 透射电子显微镜 (TEM) 和扫描电子显微镜 (SEM) 图像。 TEM 的比例尺分别代表 50 nm 和 100 nm 的比例。 SEM 的比例尺代表 200 nm 的比例。 c) 纳米凝胶的尺寸分布和 zeta 电位。 d) 纳米凝胶与细胞粘附的机制。 e) 细胞摄取 TA-siRNA 纳米凝胶后巨噬细胞的共聚焦显微镜图像。 比例尺代表 50μm 的刻度。 I、II 和 III 分别是 2、6 和 12 小时 TA-siRNA 内化的高倍共聚焦显微镜图像。 siRNA 用绿色 5-羧基荧光素 (5-FAM) 标记。 细胞核用 DAPI（蓝色）标记。 比例尺代表 20μm 刻度。
图 2. a) 从 TA-siRNA 纳米凝胶中释放 siRNA 的机制。 通过TA-siRNA纳米凝胶的降解，siRNA逐渐释放出来，其本质是TA的水解（蓝色箭头指向TA结构中可以水解的酯键）。 b) 用于评估 TA-siRNA 纳米凝胶在 RAW264.7 细胞中的基因沉默效率的免疫荧光染色。 siRNA 用 5-FAM 标记，MMP-9 用红色免疫荧光染料标记。 细胞核用 DAPI（蓝色）标记。 比例尺代表 20μm 刻度。 c)基于免疫荧光染色定量分析RAW264.7细胞中siRNA和MMP-9的水平。 阴性对照组细胞中siRNA和MMP-9的水平设定为100%。
图 3. a) PHTB(TA-siRNA) 水凝胶的适应性特性由水凝胶逃脱针头的能力表明。 20 号、22 号和 23 号针的内径分别为 0.60 毫米、0.41 毫米和 0.34 毫米。 b) 水凝胶逃避球形间隙的能力表明水凝胶的适应性。 c) 水凝胶的适应性和自愈特性。 d) 常规敷料与PHTB(TA-siRNA)水凝胶敷料在药物或基因释放上的差异。
图 4. a) 向 PHTB(TA-siRNA) 水凝胶中添加不同浓度的过氧化氢 (H2O2) 和 b) 水凝胶对 ROS 的反应机制。 c) 添加不同浓度 H2O2 后冻干水凝胶的 SEM 图像。 d) 在水凝胶中加入不同浓度的 H2O2 后 siRNA 从水凝胶中的释放速率。 e) 添加不同浓度的 H2O2 后从水凝胶中释放的 siRNA 的琼脂糖凝胶电泳分析。
图 5. PHTB(TA-siRNA) 水凝胶对 a) DPPH 自由基、b) ABTS∙+自由基和 c) H2O2 自由基的清除作用。 d) 用 PHTB(TA-siRNA) 水凝胶处理的大鼠皮下 ROS 水平。 使用二氢乙锭（DHE）荧光探针检测皮下活性氧水平。 紫色表示细胞内 ROS 的含量，蓝色表示 4',6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) 染色的细胞核。 比例尺代表 100μm 刻度。 e）检测PHTB（TA-siRNA）水凝胶清除ROS的体内实验示意图。 f) 接受不同处理的组织中的 ROS 水平。 绿色虚线表示正常皮肤组织中 ROS 的量。 g) PHTB(TA-siRNA) 水凝胶抗氧化性能的机理。
图 6. a) TA-siRNA 纳米凝胶与巨噬细胞的粘附以及纳米凝胶的细胞摄取的 TEM 图像。 b) 电场对纳米凝胶的粘附和细胞吸收的影响。 c) ES 治疗对伤口应用期间 PHTB(TA-siRNA) 水凝胶释放 siRNA 的影响。 siRNA 用绿色免疫荧光染料（即 5-FAM）标记，蓝色代表 DAPI 染色的细胞核。 比例尺代表 500 μm 的比例。
图 7. a) 糖尿病大鼠全层皮肤缺损及缺损愈合轨迹。 b）第 3、7 和 10 天缺陷的愈合率。 c) 第 3 天和第 10 天缺陷的 H&E 染色图像的低倍率（比例尺：1 mm）和高倍率（比例尺：100μm）。
图 8. a) 糖尿病慢性伤口中表达的 MMP-9、TNF-𝛼、HIF-1𝛼、IL-10 和 IL-6 的免疫荧光染色以及皮肤组织中产生的 ROS 和巨噬细胞表型标志物的标记。 蓝色代表 DAPI 染色的细胞核。 ROS 用 DHE 荧光探针（紫色）标记。 CD68 标记（绿色）巨噬细胞和 CD206 标记（红色）M2 型巨噬细胞的免疫荧光双染色。 CD68 标记（绿色）巨噬细胞和 CD86 标记（红色）M1 型巨噬细胞的免疫荧光双染色。 分析在第 7 天进行，比例尺代表 20 μm 刻度。 b）MMP-9，c）TNF-𝛼，d）ROS，e）HIF-1𝛼产生的荧光信号强度的定量分析。 对照组糖尿病慢性创面荧光信号强度设为100%。 f) 双阳性M1巨噬细胞群 g) 双阳性 M2 巨噬细胞群。 h) M2 巨噬细胞与 M1 巨噬细胞的种群比率。 i) IL-6和j) IL-10产生的荧光信号强度的定量分析。
图 9. a) 第 7 天在糖尿病慢性伤口中表达的 Col I、VEGF 和 CD31 的免疫荧光染色和在第 3 天和第 7 天收集的缺陷的激光散斑对比成像 (LSCI) 图像。比例尺代表 20μm 刻度。 糖尿病慢性伤口皮肤组织中表达的 b) Col I、c) VEGF 和 d) CD31 的量。 对照组创面荧光信号强度设为100%。 e) 不同组糖尿病慢性创面灌注指标。 f) ES 疗法和 PHTB(TA-siRNA) 水凝胶联合使用修复糖尿病伤口的机制。
小结
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黄教授
